Cy5 NHS Ester是一種廣泛應(yīng)用于生物分子標(biāo)記和熒光成像的可見光熒光染料。Cy5（Cyanine5）是一種經(jīng)典的近紅外熒光染料，發(fā)射波長在可見光范圍內(nèi)，尤其適合多重?zé)晒鈽?biāo)記和高靈敏度檢測。Cy5 NHS Ester包含一個NHS酯基團(tuán)，能夠與含有伯胺（-NH?）基團(tuán)的分子進(jìn)行共價(jià)結(jié)合，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。這一特性使其成為蛋白質(zhì)、抗體、核酸以及其他生物分子標(biāo)記的理想選擇。

2. Cy5 NHS Ester可見光熒光染料：核心特性與成分

2.1 Cy5染料特性

• 發(fā)射波長：Cy5染料的發(fā)射波長通常在650-670 nm之間，具有強(qiáng)烈的紅色熒光，在可見光至近紅外區(qū)域的熒光成像中表現(xiàn)出色，適合用于多重標(biāo)記和檢測。

2.2 NHS酯基團(tuán)

• NHS酯基團(tuán)：Cy5 NHS Ester中的NHS酯（N-羥基琥珀酰亞胺酯）能夠與生物分子中的伯胺反應(yīng)，形成穩(wěn)定的共價(jià)鍵。這一反應(yīng)通常在溫和的條件下進(jìn)行，且反應(yīng)效率高，適合標(biāo)記蛋白質(zhì)、肽鏈、核酸等。

2.3 高靈敏度與低背景

• 高靈敏度：Cy5的高量子產(chǎn)率確保了在低濃度下也能產(chǎn)生強(qiáng)烈的熒光信號，適合檢測微量生物分子。

• 低背景干擾：Cy5在遠(yuǎn)紅區(qū)發(fā)射熒光，減少了生物樣本中的自發(fā)熒光干擾，提供清晰的成像效果。

3. Cy5 NHS Ester可見光熒光染料：主要應(yīng)用領(lǐng)域

3.1 蛋白質(zhì)和抗體標(biāo)記

Cy5 NHS Ester廣泛用于蛋白質(zhì)和抗體的標(biāo)記，通過與蛋白質(zhì)上的伯胺基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，生成穩(wěn)定的Cy5標(biāo)記分子。這一標(biāo)記方法常用于免疫熒光、流式細(xì)胞術(shù)和Western blot等實(shí)驗(yàn)。

3.2 核酸標(biāo)記

在核酸研究中，Cy5 NHS Ester用于標(biāo)記DNA或RNA探針，通過標(biāo)記核酸的末端或內(nèi)部伯胺基團(tuán)，便于在熒光原位雜交（FISH）和實(shí)時(shí)PCR等實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行檢測。

3.3 多重?zé)晒獬上?/h4>

Cy5染料的發(fā)射光譜遠(yuǎn)離常見的綠色或黃色熒光染料，使其成為多重?zé)晒獬上竦睦硐脒x擇。在復(fù)雜的生物樣本中，Cy5可以與其他染料同時(shí)使用，實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記和檢測。

4. 使用方法

1. 溶液制備：將1mg Cy5 NHS Ester溶解在適當(dāng)?shù)臒o水有機(jī)溶劑（如DMSO）中，制備標(biāo)記反應(yīng)所需的工作溶液。

2. 標(biāo)記反應(yīng)：將Cy5 NHS Ester溶液加入到含有伯胺基團(tuán)的生物分子溶液中，通常在pH 7.5-8.5的緩沖液中反應(yīng)30分鐘至1小時(shí)。溫度控制在室溫或4°C。

3. 去除未反應(yīng)染料：通過透析、凝膠過濾或其他純化方法去除未反應(yīng)的Cy5染料，獲得純化的Cy5標(biāo)記生物分子。

4. 熒光檢測：使用適當(dāng)?shù)臒晒怙@微鏡或熒光光譜儀檢測Cy5標(biāo)記的生物分子的熒光信號，并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

5. 產(chǎn)品優(yōu)勢

5.1 高效標(biāo)記能力

Cy5 NHS Ester能夠在溫和條件下高效標(biāo)記含伯胺基團(tuán)的生物分子，生成穩(wěn)定的標(biāo)記物，且標(biāo)記效率高，適合多種生物分子的熒光標(biāo)記。

5.2 強(qiáng)烈的熒光信號

Cy5染料在遠(yuǎn)紅光區(qū)域發(fā)射強(qiáng)烈的熒光信號，具有高靈敏度，能夠在復(fù)雜生物樣本中提供低背景的清晰成像。

5.3 多功能應(yīng)用

由于其良好的光學(xué)性能和廣泛的生物相容性，Cy5 NHS Ester適用于從基礎(chǔ)研究到臨床診斷的多種應(yīng)用場景，靈活性。

6. 注意事項(xiàng)

• 溶解與保存：Cy5 NHS Ester應(yīng)溶解在無水DMSO或其他適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中。未使用的染料應(yīng)避光、低溫（-20°C）保存，以保持活性。

• 反應(yīng)條件優(yōu)化：根據(jù)目標(biāo)生物分子的特性，優(yōu)化反應(yīng)條件（如pH值、反應(yīng)時(shí)間）以獲得最佳的標(biāo)記效果。

• 避免水分影響：在標(biāo)記反應(yīng)過程中，盡量避免染料與水接觸，以防止NHS酯基團(tuán)的水解失活。

7. 實(shí)驗(yàn)應(yīng)用實(shí)例

在免疫熒光實(shí)驗(yàn)中，研究人員使用Cy5 NHS Ester標(biāo)記特異性抗體，通過熒光顯微鏡清晰地觀察到抗體在細(xì)胞中的分布。該染料的強(qiáng)熒光信號和低背景干擾使得研究人員能夠精確地定位靶標(biāo)蛋白，為細(xì)胞行為和分子相互作用研究提供了重要的視覺數(shù)據(jù)。

8. 總結(jié)

Cy5 NHS Ester 可見光熒光染料（1mg）是一種高效、可靠的生物分子標(biāo)記工具，特別適用于蛋白質(zhì)、抗體、核酸等生物分子的熒光標(biāo)記和檢測。其強(qiáng)烈的遠(yuǎn)紅區(qū)熒光發(fā)射、低背景干擾以及良好的生物相容性，使其成為熒光成像、多重標(biāo)記和分子檢測中的理想選擇。Cy5 NHS Ester為科學(xué)研究和臨床應(yīng)用提供了強(qiáng)大的支持，幫助研究人員在復(fù)雜生物體系中實(shí)現(xiàn)精確的熒光檢測和成像。