賽默飛超微量分光光度計（如NanoDrop系列）是一種常用于測量DNA、RNA、蛋白質(zhì)濃度的實驗室儀器。其操作簡單、測量快速、樣品消耗極少，因此廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實驗中。以下是詳細(xì)的使用方法，包括準(zhǔn)備、操作步驟和注意事項。

一、準(zhǔn)備工作

1. 設(shè)備檢查：

• 確保分光光度計連接電源并打開設(shè)備。

• 檢查設(shè)備是否已正確連接到計算機，軟件是否安裝并可正常運行（如NanoDrop軟件）。

2. 樣品準(zhǔn)備：

• 確保樣品充分混勻并適當(dāng)稀釋（如果濃度過高可能影響讀數(shù)）。

• 樣品通常為DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其他生物分子溶液。

3. 清潔檢測平臺：

• 使用無絨擦拭紙輕輕擦拭測量平臺（光纖）和上臂，確保無灰塵和殘留物，避免影響測量結(jié)果。

4. 選擇適合的模式：

• 根據(jù)實驗需求選擇相應(yīng)的測量模式，如核酸（DNA、RNA）模式、蛋白質(zhì)模式、或其他特殊分析模式。

二、操作步驟

1. 打開NanoDrop軟件

在計算機上打開NanoDrop軟件，選擇需要的測量模式（如核酸、蛋白質(zhì)、A280等）。不同模式根據(jù)測量目標(biāo)的不同會有所變化。

2. 校準(zhǔn)設(shè)備（Blank）

每次測量前，使用空白樣品進行校準(zhǔn)。空白樣品一般為純水或與樣品相同的緩沖液，校準(zhǔn)步驟如下：

• 將1-2微升的空白液體滴在光纖平臺上。

• 放下上臂，確保液體被夾在上臂和測量平臺之間。

• 點擊軟件中的“Blank"按鈕，設(shè)備將進行校準(zhǔn)以消除背景吸光度。

3. 加入樣品

校準(zhǔn)完成后，按照以下步驟進行樣品測量：

• 用移液器取1-2微升樣品，準(zhǔn)確滴加到光纖平臺的中心位置。

• 輕輕放下上臂，使樣品處于光纖間的檢測區(qū)域。

• 在軟件中點擊“Measure"按鈕，開始樣品的測量過程。

4. 讀取結(jié)果

• 測量結(jié)果會立即顯示在軟件界面上，包括吸光度（A260、A280）和核酸或蛋白質(zhì)的濃度值。

• 如果是核酸測量，通常會提供A260/A280和A260/A230的比值，用于評估樣品的純度。

5. 清潔平臺

每次測量完成后，都應(yīng)使用無絨擦拭紙輕輕擦拭光纖平臺和上臂，確保樣品殘留被清除，避免交叉污染。

三、數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出

• NanoDrop軟件通常提供了數(shù)據(jù)保存和導(dǎo)出功能。在測量完成后，用戶可以選擇保存數(shù)據(jù)到電腦中，或?qū)С鰹镋xcel或其他格式的文件，便于后續(xù)分析和記錄。

四、注意事項

1. 樣品體積：
   超微量分光光度計的設(shè)計允許使用極少量的樣品，通常只需1-2微升。如果樣品體積過少，可能導(dǎo)致檢測不準(zhǔn)確或無法進行測量。

2. 樣品純度：
   核酸的A260/A280比值應(yīng)在1.8-2.0之間，如果比值偏離這個范圍，可能表示蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)的污染。

3. 定期校準(zhǔn)：
   建議定期使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進行校準(zhǔn)，以確保設(shè)備的測量精度。

4. 設(shè)備維護：
   長期使用后，應(yīng)定期對光纖平臺進行清潔，防止樣品殘留物影響讀數(shù)。遵循廠家提供的維護指南可以延長設(shè)備使用壽命。

5. 樣品稀釋：
   高濃度樣品可能超出儀器的線性檢測范圍，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。必要時，建議先稀釋樣品再進行測量。

五、常見問題與解決

1. 讀數(shù)異常：

• 樣品可能含有氣泡或未充分混勻。

• 平臺上殘留有之前的樣品。

• 樣品濃度過高，需稀釋后再測。

2. 低純度比值（A260/A280或A260/A230）：

• 樣品中可能含有蛋白質(zhì)、酚類或其他污染物。需進一步純化樣品。

• 使用錯誤的空白液體進行校準(zhǔn)，需確保空白液體與樣品溶劑一致。

3. 平臺殘留液體：

• 每次測量后應(yīng)立即清潔平臺，避免樣品干燥在平臺上。

• 如果有殘留難以清除，可以使用70%乙醇或去離子水濕潤擦拭紙進行清潔。

六、總結(jié)

賽默飛超微量分光光度計是實驗室進行生物分子濃度測定的強大工具，使用簡單、快速且節(jié)省樣品。在日常操作中，注意樣品的準(zhǔn)備、平臺清潔和設(shè)備校準(zhǔn)，可以確保獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果。